發(fā)布時間:2012-03-19
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超微粉碎決明子對其大黃酚溶出量的影響
李曉明，王躍生，閆寒，章軍，唐曉軍
（中國中醫(yī)研究院中藥研究所，北京 100700）
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摘要：對超微粉碎后決明子進(jìn)行大黃酚溶出量的對比研究. 結(jié)果表明：在相同提取時間和條件下水煎煮決明子藥材，大黃酚的提取率只有7.6%，而經(jīng)不同條件超微碎后的各組決明子的提取率分別提高到69.7%、57.1%、32.4%；5min水浸泡下，決明子微粉中總大黃酚含量與藥材水煎煮90min的含量相當(dāng).粉碎前對樣品進(jìn)行適當(dāng)干燥可提高總大黃酚的溶出量.
關(guān)鍵詞：超微粉碎；決明子；大黃酚
中圖分類號：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1005-9903（2001）06-0006-03
超微粉碎技術(shù)在中藥領(lǐng)域中的應(yīng)用是近年來興起的一項新技術(shù)。經(jīng)超微粉碎后中藥材，粒度細(xì)微均勻，細(xì)胞壁多被破碎，甚至完全破碎，因而比表面積增加，有利于內(nèi)容物的溶出，便于有效成分的提取。所以，采用超微粉碎技術(shù)處理中藥材是該技術(shù)在中藥領(lǐng)域中應(yīng)用的一個重要方面，因而合理應(yīng)用該技術(shù)具有較現(xiàn)實的研究意義。
決明子為豆科植物決明Cassia obtusifolia L.或小決明子C.tora L.的成熟種子，為常用中藥[1]。決明子具有驅(qū)風(fēng)散熱、清肝明目、潤腸通便功能，臨床常用于治療目赤腫痛、青盲、雀目、大便秘結(jié)等癥?，F(xiàn)代研究表明，決明子含蒽醌含量最高，文獻(xiàn)報道約為0.25%[2]，總蒽醌含量約為0.61%[3]；另外還含有維生素A樣物質(zhì)、粘液、蛋白質(zhì)、谷甾醇、氨基酸及脂肪油等成分。近年來研究證明，決明子還具有降壓作用[4]，此外，決明子還具有降壓作用[5]及明顯改善體內(nèi)膽固醇的分布，這些均有利于預(yù)防動脈粥樣硬化[6]等心腦血管疾病。本文擬研究經(jīng)超微粉碎后的決明子，其微粉中對所含蒽醌類化合物大黃酚溶出量的影響。
1、儀器與材料
1.1儀器 超微粉碎機(jī)：型號：SQW-6型超微粉碎機(jī)。
1.2日立7400液相色譜儀。
1.3藥材 決明子由同仁堂飲片廠提供，為C. obtusifolia L.T C.tora L.的成熟種子的混合物；決明子經(jīng)超微粉碎加工并提供粒度的測定在電腦成像粒度分析儀上進(jìn)行，各微粉樣品的粉碎條件如下：
1.4試劑 大黃酚對照品購自中國藥品生物制品檢定所(批號:796-9302)。甲醇為色譜純，氯仿、磷酸為分析純，水為超純水。
2、方法與結(jié)果
2.1色譜條件 色譜柱：YWGC1810µm（4.6mm×250mm）,流動相：甲醇-0.1%磷酸液（90：10），流速：1ml/min，檢測波長：254nm，柱溫：30℃。
2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密稱定大黃酚對照品4.18mg，用甲醇溶解并定容于50ml棕色量瓶中，精確吸取0.5、1.0、2.0、4.0、5.0ml于5個10ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻。按色譜條件測定，進(jìn)樣量為20µl。線性范圍0.0836～0.8360µg,線性回歸方程為y＝2.69×106X-7.83×103，r＝0.9998。
2.3精密度試驗 取大黃酚對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10µl，對照品大黃酚峰面積積分值的RSD為1.4%。
2.4 穩(wěn)定性試驗 取決明子微粉樣品溶液（干燥1hr、粉碎32′、提取15′），在0、2、4、6hr分別進(jìn)樣10µl，記錄峰面積，結(jié)果4次進(jìn)樣峰面積RSD為1.9%。
2.5 重復(fù)性試驗 取決明子微粉樣品溶液（干燥1hr、粉碎32′、提取15′）5份。按樣品測定法測定，結(jié)果大黃酚的平均含量為1.34mg/g，RSD為1.8%。
2.6加樣回收試驗 取已知含量的決明子微粉樣品（干燥1hr、粉碎32′、提取15′）約0.10g，精密稱定，加入對照品溶液適量（0.116～0.155mg），揮干，按樣品測定法測定，平均回收率為93.5%，RSD為2.5%（n=4）。
3 供試品溶液制備與測定
3.1取決明子粉末（用小型粉碎機(jī)粉碎，過40目篩，不去皮）2g，精密稱定，用索氏提取器甲醇提取至無色提取液定容于100ml量瓶；精密吸取該提取液10ml于蒸發(fā)皿中，50℃水浴蒸干，加2ml 2.5mol/L硫酸液溶解殘渣，洗入20ml具塞試管，沸水浴上水解2h，間斷振搖提取三次（8、8、4ml），合并氯仿液，用蒸餾水洗滌二次，蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至10ml量瓶中，搖勻，即得。
3.2取決明子約10g共5份，精密穩(wěn)定，分別加蒸餾水100ml于具塞三角瓶中，稱重，加熱回流15′、30′、45′、60′、90′，放冷，稱重，加蒸餾水補(bǔ)足重量，搖勻，過濾，濾液待用；精密吸取以上各提取液10ml，于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，置干燥器中至恒重，稱重，用于浸出物量測定。
3.3 超微粉碎前決明子中總大黃酚含量及提取率的測定 吸取上述五組提取液2ml至大試管中，加5mol/L硫酸液2ml，其余操作按3.1制備樣品液，按色譜條件測定。結(jié)果見表1：
表1不同提取時間對決明子總提取物含量和總大黃酚含量的影響
3.4超微粉碎后決明子中總大黃酚含量測定 取決明子各微粉組之微粉約1g共4份，置具塞三角瓶內(nèi)，加蒸餾水50ml，在80℃水浴上溫浸5、15、30、45min；取出，放冷，離心，吸取上清液2ml置于20ml具塞大試管，加5mol/L硫酸溶液2ml，其余操作按3.1制備樣品液，按色譜條件測定。結(jié)果見表2、表3：
4討論
4.1粉碎條件與粒度的相關(guān)性 從“決明子粉碎條件及粒度”表中可以看出：①物料的干燥程度或含水率對粉碎細(xì)度有直接的影響，即含水率越低有助于粉碎成細(xì)顆粒；②當(dāng)含水率相同時，粉碎時間越長粉碎的粒度越細(xì)小，但粉碎到一定的時間點時，再延長粉碎時間，則對粒度的影響變小，提示：對決明子的粉碎時，存在最佳粉碎條件的確定問題。
4.2粉碎前后決明子總大黃酚提取率的比較
①從表1中可以看出，未粉碎決明子在提取條件相同的情況下，提取時間越長，提取率越高，煮提3次，每次30min時，提取率可達(dá)到71.0%。
②從表3中可以看出，超微粉碎后，提取時間的延長對提取率影響不大，提示：經(jīng)超微粉碎后，細(xì)胞壁被破碎，有助于總大黃酚的溶出，且溶出速度加快，提取5min時，即可達(dá)到或接近濃度平衡；實驗中還發(fā)現(xiàn)，隨著提取時間的延長，溶液的粘稠度也不斷增加。兩者比較：水煎煮決明子藥材（提取15min），大黃酚的提取率只有7.6%（以索氏提取器為計），而經(jīng)不同條件超微粉碎后的各組決明子的提取率分別提高到69.7%、57.1%、32.4%；如按提取總大黃酚含量不變比較，在80℃、5min水浸泡下，決明子微粉（干燥4h、粉碎32min）中總大黃酚含量與藥材水煎煮90min的含量相當(dāng)。
③從表3中可以看出：用相同的提取時間下，粒度越細(xì)，溶出量越高，如粉碎25min、提取5min組，未干燥溶出量為0.42，干燥1h為1.60，而干燥4h為1.73。但從延長粉碎時間、增加細(xì)度的樣品組看，細(xì)度越小，溶出量反而下降，尤其是粉碎40min組，溶出量下降明顯；而未干燥組，由于粉碎時間延長，對粒度影響不大，因此對溶出量的減少不明顯，提示：粉碎時間的延長，對總大黃酚類成分有一定影響，說明，從有效成分的溶出和保留來看，也存在最佳粉碎條件的確定問題。可見，超微粉碎技術(shù)應(yīng)用于中藥的粉碎時，存在一定的應(yīng)用規(guī)律和應(yīng)用條件等科學(xué)問題，并不是一個簡單的粉碎過程，應(yīng)引起足夠的重視。
在本實驗中，將決明子粉碎去皮，其總大黃酚含量增加近74%，提示蒽醌類物質(zhì)主要存在于果實中，皮中含量較少；游離的大黃酚僅占總大黃酚含量的1.47%。此外，有關(guān)超微粉碎后對決明子中蒽醌類成分穩(wěn)定性的研究及相關(guān)藥效學(xué)研究正在進(jìn)行中。
參考文獻(xiàn)：
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